详细信息

　　【检验原理】
 

　　伯氏疏螺旋体(BB)荧光探针法PCR试剂盒采用荧光探针检测目标序列扩增程度的PCR技术。其方法是通过引入带有荧光标记的探针分子，在扩增目标序列的同时检测其PCR产物的有效扩增程度，从而确定是否有特定基因的存在。
 

　　【使用特点】
 

　　1. 精准度高，可靠性高，可检测到极低限度的目标序列，检测结果具有高度的精准度，可比较准确地判断目标基因是否存在。
 

　　2. 广泛适用于基因定量、基因表达、突变检测、病毒检测等多种领域的研究和诊断。
 

　　3. 伯氏疏螺旋体(BB)荧光探针法PCR试剂盒检测结果可视化，检测结果通过荧光信号表现出来，当目标基因存在时，产物会呈现出荧光恒定，而无荧光信号则表示目标基因不存在。
 

　　4. 采用的荧光探针选择合理，能有效地减少PCR扩增的假阳性结果。
 

　　【储存条件及有效期】
 

　　-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。
 

　　【适用仪器】
 

　　ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
 

　　说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
 

　　1.1 DNA 提取
 

　　1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL 核酸提取液)， 100℃恒温处理 10min，13,000 rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
 

　　2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的DNA 提取试剂盒(离心柱提取法)，请严格按照试剂盒说明书进行操作。
 

　　2. 检测方法的局限性
 

　　a. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
 

　　b. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
 

　　c. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
 

　　d. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
 

　　e. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
 

　　f. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
 

　　g. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

 

　　1.1 结果判断
 

　　阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
 

　　可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
 

　　阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
 

　　3. 质控标准
 

　　阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
 

　　阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
 

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