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汉坦病毒IgG/IgM酶联免疫检测试剂盒使用说明书

【用途】

流行性出血热(EHF)又称肾病综合征出血热(HFRS)，是由汉坦病毒(Hantaan type)引起的。与流行性*病相比(因近距离接触普马拉病毒而被传染)，HFRS的传染性更严重，一般都会伴随有尿毒症、呼吸麻痹和伴随有典型休克综合症的出血，甚至死亡。这种疾病起初的症状是流行性感冒样症状。HFRS起初的典型症状是血小板减少症和白细胞增多症。汉坦病毒主要分布于亚洲和巴尔干各邦地区，通过直接接触啮齿动物、啮齿动物的排泄物或分泌物而传染给人。士兵、农民和露营者都特别容易受到危险。

【试验原理】

包被孔中包被了重组的汉滩型汉坦病毒核壳体蛋白。在检测IgM抗体时，为了避免由IgG抗体或类风湿因子引起的非特异性因素的干扰，病人血清必须与类风湿因子IgG吸附剂一起孵育。
实验过程孵育期间，抗重组汉坦病毒抗原的特异性抗体会结合到固相包被板上。洗板后，我们分别用过氧化酶标记的抗人IgG和IgM抗体检测特异性的IgG和IgM。加入底物液后显色，溶液所显示的颜色强度与结合的抗体量成正比。之后用酶标仪读取OD值。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

1.     2~8℃避光保存，防止冷冻，有效期为12个月。

2.     包被板开封后2~8℃避光保存，使用期限为15天。

【适用仪器】

含450nm和630nm波长酶标仪；37℃恒温设备；可调微量移液器。

【样本要求】

1.     为取得Z佳实验效果，避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品；

2.     短期（7天）将进行检测的血清样品可存放于2～8℃；如需长期保存，应置于-20℃或以下，避免反复冻融。

【检验方法】

1.      洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释（如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水），充分混匀即为工作洗涤液。

2.      样本稀释：用样本稀释液（5号液）将待检血清按1:100稀释（如5μl血清＋495μl样本稀释液），充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3.      加样反应：每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟；后一次甩净，拍干。

4.       加酶反应：除空白对照孔外，其余每孔加酶结合物（1号液）1滴，37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5.        显色反应：加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃下避光显色10分钟。

6.        终止反应： 加终止液（6号液）1滴，以空白对照调零，用酶标仪于450nm波长（630nm作为参比波长）读取OD值。

【参考值】

1.     Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值＜0.08时按0.08计)。

2.     有效性判定：

空白对照孔OD值＜0.05（若大于0.05则实验无效）；

阴性对照孔OD值≤0.10（若大于0.10则实验无效）；

阳性对照孔OD值≥0.30（若小于0.30则实验无效）。

【检验结果的解释】

样本OD值≥COV值时，判为禽流感病毒抗体阳性；

样本OD值＜COV值时，判为禽流感病毒抗体阴性。                        

【检验方法的局限性】本试剂仅适用于检测鸭血清。

【注意事项】

1.     包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时，应平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中，4℃密封保存。

2.     滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀，首滴弃去；滴加试剂时瓶身应保持竖直。

3.     瓶盖每次使用后要盖紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

4.     孵育时，推荐使用水浴箱。如无水浴箱，可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。

5.     用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性，须小心使用。

试剂盒应当在2~8℃运输和储存，避免高温和阳光直射，没有打开的试剂能保存到有效期。包被条在封闭的袋子内2~8℃能保存到有效期。准备好的试剂的储存及其稳定性在相应章节已阐明。
开封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期

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