禽脑脊髓炎抗体elisa检测试剂盒
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详细信息

禽脑脊髓炎抗体elisa检测试剂盒使用说明书

【用途】

用来检测鸡血清中的禽脑脊髓炎病毒(AEV)抗体

【试验原理】

禽脑脊髓炎,也称雏鸡传染性颤搐病,主要通过鸡蛋传播,感染鸡和易感鸡或成年禽之间亦可发生水平传播。青年鸡(1~4周龄)主要临床表现为共济失调、麻痹或头颈快速震颤等症状,成年鸡表现为产蛋能力下降。血清中的病毒抗体可通过酶联免疫的方法检测。血清中的AEV抗体水平及整个鸡群的免疫状况可用ELISA方法进行监测。

将灭活的AEV抗原包被在微孔板上,加入稀释后的血清并孵育,血清中的抗AEV抗体将与包被在微孔板上的AEV结合,形成AEV抗原-抗体复合物。然后洗掉未结合的物质,加碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG的酶标结合物至微孔板中,酶标物将与AEV抗原-抗体复合物结合。孵育后洗掉未结合的结合物,然后加入底物溶液。底物与碱性磷酸酶反应并生成一种有颜色的产物,后终止反应,将颜色固定。颜色的深浅可用酶标仪(405-410nm)测定。

 

【主要组成成份】

序号

名称

规格(48T/96T)

序号

名称

规格(48T/96T)

1

包被板

12孔×4/8条

7

终止液(6号液)

6ml×1瓶

2

酶结合物(1号液)

3/6ml×1瓶

8

阳性对照品

0.8ml×1支

3

浓缩洗涤液(2号液)

25/50ml×1瓶

9

阴性对照品

0.8ml×1支

4

底物(3号液)

6ml×1瓶

10

不干胶膜

1/2片

5

显色剂(4号液)

6ml×1瓶

11

自封袋

1个

6

样本稀释液(5号液)

25/50ml×1瓶

12

说明书

1份

【储存条件及有效期】

1.     2~8℃避光保存,防止冷冻,有效期为12个月。

2.     包被板开封后2~8℃避光保存,使用期限为15天。

【适用仪器】

含450nm和630nm波长酶标仪;37℃恒温设备;可调微量移液器。

【样本要求】

1.     为取得Z佳实验效果,避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品;

2.     短期(7天)将进行检测的血清样品可存放于2~8℃;如需长期保存,应置于-20℃或以下,避免反复冻融。

【检验方法】

百日咳凝集反应用抗原
荚膜型肺炎球菌诊断血清
弯曲菌诊断血清
单增李斯特菌诊断血清
毒素原性大肠菌纤毛抗血清

1.      洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液(2号液)按1:10稀释(如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作洗涤液。

2.      样本稀释:用样本稀释液(5号液)将待检血清按1:100稀释(如5μl血清+495μl样本稀释液),充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。

3.      加样反应:每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔(分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl)。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次,每次均需停留1分钟;后一次甩净,拍干。

4.       加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶结合物(1号液)1滴,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗涤,拍干。

5.        显色反应:加底物(3号液)和显色剂(4号液)各1滴,混匀,37℃下避光显色10分钟。

6.        终止反应: 加终止液(6号液)1滴,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。

【参考值】

1.     Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值<0.08时按0.08计)。

2.     有效性判定:

空白对照孔OD值<0.05(若大于0.05则实验无效);

阴性对照孔OD值≤0.10(若大于0.10则实验无效);

阳性对照孔OD值≥0.30(若小于0.30则实验无效)。

【检验结果的解释】

样本OD值≥COV值时,判为禽流感病毒抗体阳性;

样本OD值<COV值时,判为禽流感病毒抗体阴性。                        

【检验方法的局限性】本试剂仅适用于检测鸭血清。

【注意事项】

1.     包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时,应平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中,4℃密封保存。

2.     滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀,首滴弃去;滴加试剂时瓶身应保持竖直。

3.     瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

4.     孵育时,推荐使用水浴箱。如无水浴箱,可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。

5.     用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。

 

公司优势:
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