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禽脑脊髓炎抗体elisa检测试剂盒使用说明书

【用途】

用来检测鸡血清中的禽脑脊髓炎病毒(AEV)抗体

【试验原理】

禽脑脊髓炎，也称雏鸡传染性颤搐病，主要通过鸡蛋传播，感染鸡和易感鸡或成年禽之间亦可发生水平传播。青年鸡（1~4周龄）主要临床表现为共济失调、麻痹或头颈快速震颤等症状，成年鸡表现为产蛋能力下降。血清中的病毒抗体可通过酶联免疫的方法检测。血清中的AEV抗体水平及整个鸡群的免疫状况可用ELISA方法进行监测。

将灭活的AEV抗原包被在微孔板上，加入稀释后的血清并孵育，血清中的抗AEV抗体将与包被在微孔板上的AEV结合，形成AEV抗原-抗体复合物。然后洗掉未结合的物质，加碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG的酶标结合物至微孔板中，酶标物将与AEV抗原-抗体复合物结合。孵育后洗掉未结合的结合物，然后加入底物溶液。底物与碱性磷酸酶反应并生成一种有颜色的产物，后终止反应，将颜色固定。颜色的深浅可用酶标仪（405-410nm）测定。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

1.     2~8℃避光保存，防止冷冻，有效期为12个月。

2.     包被板开封后2~8℃避光保存，使用期限为15天。

【适用仪器】

含450nm和630nm波长酶标仪；37℃恒温设备；可调微量移液器。

【样本要求】

1.     为取得Z佳实验效果，避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品；

2.     短期（7天）将进行检测的血清样品可存放于2～8℃；如需长期保存，应置于-20℃或以下，避免反复冻融。

【检验方法】

1.      洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释（如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水），充分混匀即为工作洗涤液。

2.      样本稀释：用样本稀释液（5号液）将待检血清按1:100稀释（如5μl血清＋495μl样本稀释液），充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3.      加样反应：每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟；后一次甩净，拍干。

4.       加酶反应：除空白对照孔外，其余每孔加酶结合物（1号液）1滴，37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5.        显色反应：加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃下避光显色10分钟。

6.        终止反应： 加终止液（6号液）1滴，以空白对照调零，用酶标仪于450nm波长（630nm作为参比波长）读取OD值。

【参考值】

1.     Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值＜0.08时按0.08计)。

2.     有效性判定：

空白对照孔OD值＜0.05（若大于0.05则实验无效）；

阴性对照孔OD值≤0.10（若大于0.10则实验无效）；

阳性对照孔OD值≥0.30（若小于0.30则实验无效）。

【检验结果的解释】

样本OD值≥COV值时，判为禽流感病毒抗体阳性；

样本OD值＜COV值时，判为禽流感病毒抗体阴性。                        

【检验方法的局限性】本试剂仅适用于检测鸭血清。

【注意事项】

1.     包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时，应平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中，4℃密封保存。

2.     滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀，首滴弃去；滴加试剂时瓶身应保持竖直。

3.     瓶盖每次使用后要盖紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

4.     孵育时，推荐使用水浴箱。如无水浴箱，可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。

5.     用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性，须小心使用。

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